WH0096 小鼠组织直接PCR扩增试剂盒

小鼠组织直接PCR扩增试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要小鼠组织直接PCR扩增试剂盒等核酸扩增(PCR)产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括小鼠组织直接PCR扩增试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：小鼠组织直接PCR扩增试剂盒
英文名称：Mouse Tissue Direct PCR Kit
产品货号：WH0096
产品规格：50次|200次

本试剂盒采用独特的包装体系，包含了快速制备小鼠组织基因组DNA和后续PCR扩增的所有试剂，适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法提取基因组DNA并用于后续的PCR扩增和检测。整个提取过程不包含匀浆、破碎、过夜消化、酚lǜ仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，实验操作简便、快捷，而且结果稳定可靠。

本试剂盒提供的2× Direct PCR MasterMix是一种高扩增兼容性的PCR试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行特异扩增。该预混Mix包含抗体修饰的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和稳定剂，操作时只需加入粗提模板和引物即可进行后续检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的检测筛选。Mix中预混有电泳染料，可在反应结束后直接进行电泳检测，使用方便快捷。PCR产物的3′端带A，可进行TA克隆。

产品特点：
·简单快速：适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法基因鉴定。
·高特异性：本产品所用Taq酶为抗体修饰热启动酶，具有的模板和引物亲和性及扩增特异性，特别适合基因分型和转基因鉴定。
·基因检测：本产品操作简便，结果可靠，特别适合小鼠的高通量分析检测。

组分	25μl×50rnx	25μl×200rnx
Tissue Lysis Buffer	5ml	20 ml
Digestive Enzyme	200μl	800 μl
2×Direct PCR MasterMix	625 μl	2×1.25ml
RNase-Free ddH2O	1 ml	2×1 ml

储存条件：组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer和Digestive Enzyme在室温（15-25℃)干燥条件下可保存12个月；2× Direct PCR MasterMix在-20℃条件下可长期保存，多次冻融不会影响活性，如需经常使用，可存放于4℃。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer应放置于室温保存，如放在低温（-20℃或4℃）保存时有沉淀析出，可在37℃水浴中重新溶解沉淀，并摇匀溶液后使用。
3．本产品提供的2×Direct PCR MasterMix为2×母液，使用时需加入模板和引物，并加入灭菌水补足体积，使其浓度为1x即可进行反应。

操作步骤：
1．次使用本试剂盒时，请仔细查看组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer中是否有结晶析出，如有结晶请将该缓冲液于室温充分平衡至结晶完全溶解，或在37℃水浴中重新溶解沉淀摇匀后使用。组织裂解缓冲液溶解后在室温保存。
2．按照下表配方配制组织消化液：

加入物	加入量
Tissue Lysis Buffer	96 μl
Digestive Enzyme	4 μl

注意：消化液请尽量现用现配，以保证Digestive Enzyme的活性。
3．取少量小鼠组织样品（约5~10mg）于1.5ml的离心管中，加入100 μl组织消化液，确保组织样品完全浸润于组织消化液中，65℃处理30min。期间每隔10 min左右轻弹管底，提高消化效率。
4．消化结束后，瞬时离心，并于95～100℃下处理5 min。
5．PCR扩增反应。取1 μl上清用于PCR反应，参考PCR体系及扩增程序如下：

参考反应体系：
PCR反应体系的建立，25 μl体系如下：

加入物	加入量
2× Direct PCR MasterMix	12.5 μl
正向引物（10μM）	0.5 μl
反向引物（10μM	0.5 μl
模板DNA	1.0 μl
RNase-Free ddH2O	补至25 μl

试剂全部加好后，混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。

参考反应条件：

温度	时间	循环数
95℃	3min	1cycle
94℃	30sec	35cycles
55℃*	30sec
72℃	1kb/min
72℃	5min	1cycle
4℃	Holding	1cycle

*通常引物退火温度比引物的解链温度（Tm)低5℃，具体退火温度设定可根据引物情况进行调整。

结果检测：
反应结束后取5~10 μl反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定zuì佳反应条件。操作中如发现管壁或管盖上有液体可以瞬时离心将其甩至管底。

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名称：5M甜菜碱溶液，PCR级
货号：BTN70902
规格：1.5mL
本产品为浓度为5M的甜菜碱的水溶液，可以直接加入到PCR反应或测序反应中提高扩增或测序的效率，其详细的用途包括：
1. 降低富含GC的模板形成二级结构的可能,有助于富含GC的模板的PCR扩增和测序。
2. 降低变性温度对碱基的依赖性。
3. 提高LA-PCR的扩增效率。
4. 提高Taq DNA聚合酶的稳定性。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品加入PCR反应体系中，使其终浓度在1.0-1.7M之间即可。其他按常规操作进行即可。


名称：Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
货号：BTN100814
规格：5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物，可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：2×Taq MasterMix(含染料)
货号：WE0102
规格：1ml|5ml|25ml
  Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液可根据使用量的多少调节扩增产物的特异性和得率，使操作更加简单快捷，并可zuì大限度地减少人为误差和污染。的MasterMix配方使扩增产物得率高，重复性强，稳定性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml	25ml
2×Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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货号	名称	规格
BTN70902	5M甜菜碱溶液，PCR级	1.5mL
BTN130986	即用型热启动PCR试剂盒	1.5mL
YT372	Pfu DNA聚合酶(Pfu酶)(含buffer)	200U|1000U
YT373	YT Taq DNA聚合酶(Taq酶)(含buffer)	200U|1000U
YT377	富含GC PCR Buffer	2ml
WE0107	Pfu DNA Polymerase	500U

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