QN1178 两性电解质(pH6～9)

两性电解质(pH6～9)的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品仅用于生物化学研究方面，两性电解质(pH6～9)是我司众多优质蛋白质研究之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括两性电解质(pH6～9)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：两性电解质(pH6～9)
英文名称：Ampholine pH6-9
产品货号：QN1178
产品规格：12ml

储存条件：2～8℃

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货号	名称	规格
BTN81218	植物总蛋白质微量提取试剂盒(SDS-PAGE专用)	30次
BTN80809	蛋白磷酸酶抑制剂混合液Ⅰ	1mL
SNM501	浓缩型SABC-FITC免疫荧光试剂盒(适用人/大鼠/小鼠/山羊/兔中一种)	400张片
KFS051	kFluor594标记抗小鼠免疫荧光染色试剂盒	300T
KFS093	Western转膜液(干粉)	1L|10×1L
SY0306	抑肽酶	5mg|50mg

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名称：蛋白质分子量标准(14.4-116kD)
货号：YT627
规格：200μl|1ml
本品包含了从14.4kD到116kD共7种纯化的蛋白质(见下图)，适合作为SDS-PAGE的蛋白质分子量标准。一个包装的本产品后续如果用于考马斯亮蓝染色，大约可以使用约20-40次。

产品特点：
1. 本蛋白质分子量标准已经配制在1X SDS-PAGE上样缓冲液中，可以直接使用。
2. 根据上样孔的大小，本蛋白质分子量标准通常每次上样5-10微升，就可以用染色观察到非常清楚的蛋白条带。


本蛋白Marker包含7个条带：14.4kD，18.4kD，25kD，35kD，45kD，66.2kD，116kD

注意事项：
1. 本蛋白质分子量标准用1X SDS-PAGE上样缓冲液配制，不适用于非变性PAGE胶。
2. Western实验时，建议使用百奥莱博的彩色预染蛋白分子量标准(YT621、YT622)，以便更好地观察转膜效果。

储存条件：-20℃，有效期一年。

名称：RIPA裂解液(强)
货号：WE0258
规格：100ml
  RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液(强)可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
  RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4)，150mM NaCl，1%Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等。


注意事项：
1、为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购，如：WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：WE0259 蛋白酶抑制剂混合物，WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液，以此类推。

使用方法：

一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3．加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，试剂使用量请参考附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。

表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表

细胞培养板类型或培养面积	RIPA 裂解液使用量
100 mm	500-1000μl
60 mm	250-500μl
6孔培养板	200-400μl /孔
24孔培养板	100-200μl /孔
96孔培养板	50-100μl /孔

4、将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞，2,500×g离心5分钟，弃去上清。
2、可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂)，每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong)，吹打均匀。
4、冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。

二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Strong)，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量，按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后将组织剪成细小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。

表2 蛋白裂解液性能、参数比较

目录号	WE0258	WE0257
名称	RIPA裂解液(强)	RIPA裂解液(中)	RIPA裂解液(弱)	SDS裂解液
裂解强度	强	中	温和	强
有效裂解成分	1%Triton X-100， 1%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS	1% NP-40， 0.5%脱氧胆酸钠 , 0.1% SDS	1% NP-40， 0.25%脱氧胆酸钠	1%SDS
膜蛋白提取	很好	较好	一般	很好
胞浆蛋白提取	很好	很好	很好	很好
核蛋白提取	很好	较好	较好	很好
主要用途	WB，IP	WB，IP	WB，IP，CO-IP	WB，CHIP

储存条件：2～8℃

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