Y13606 克拉霉素

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特别提示：包括克拉霉素在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：克拉霉素
英文名称：Clarithromycin
产品货号：Y13606
产品规格：1g|5g|25g|100g

CAS：81103-11-9
分子式：C₃₈H₆₉NO₁₃
分子量：747
介绍：白色结晶性粉末或无色针状结晶，无臭，味苦
熔点：222 225℃
储存条件：RT
来源：合成
溶解性：较易溶于氯fǎng或丙酮，微溶于乙醇，yǐ醚或甲醇，几不溶于水

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规格：5×1ml

名称：头孢他啶
货号：QN0052
规格：1g
CAS：72558-82-8
分子式：C22H22N6O7S2
分子量：546.58
储存条件：RT
性状：无色结晶或白色粉末。
别名：头孢噻甲羧肟

名称：他克莫司
货号：QN0067
规格：50mg
CAS：104987-11-3
分子式：C44H69NO12
分子量：804.02
储存条件：-20℃
纯度：≥98%
别名：大环哌喃;他克莫斯;泰克利马;富吉霉素;藤毒素

名称：潮霉素B
货号：QN0095
规格：1g
本品由吸水链霉菌代谢产生的一种氨基糖苷类抗生素，通过干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核(如细菌)、真核(如酵母菌，真菌)和高等哺乳动物真核细胞。本品是无菌的潮霉素B溶液(100mg/ml)，可直接用培养液稀释使用。

CAS：31282-04-9
分子式：C20H37N3O13
分子量：527.52
储存条件：2～8℃
性状：澄清或轻微浑浊黄色溶液

大肠杆菌( Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因(hyg或hph)，编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。另外，由于作用模式的差异，常与G418，Zeocin™ 和Blasticidin S联合使用进行双抗性阳性细胞株的选择。潮霉素B还能用作抗病毒剂，因其选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，且具有抑制翻译的功效。还可混合入动物饲料中起到驱虫功能。

使用方法：
1. 常用筛选浓度
注意：潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定zuì佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。

2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素zuì低浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1)天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2)根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。

终浓度(μg/mL)	培养基体积(ml)	5mg/ml潮霉素B加入体积(ml)
50	9.9	0.1
100	9.8	0.2
250	9.5	0.5
500	9.0	1.0
750	8.5	1.5
1000	8.0	2.0

3)第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4)接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5)按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死大多数细胞的zuì低浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。

3. 稳定转染细胞的筛选
1)转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤效果zuì好。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，zuì好将细胞稀释至丰度不超过25%。
2)每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3)筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4)挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5)之后更换正常培养基培养即可。

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