SY0027 改进型DNA聚合酶

北京百奥莱博供应的改进型DNA聚合酶用于科学研究，我公司专注于核酸扩增(PCR)产品的研发、生产和供应，为您提供的改进型DNA聚合酶质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括改进型DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：改进型DNA聚合酶
英文名称：Taq Plus DNA Polymerase
产品货号：SY0027
产品规格：250U

Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性 (校对活性)的蛋白组成的混合酶。其保真性是Taq DNA Polymerase的5倍，且具有更强的扩增性能。一般情况下，使用Taq Plus DNA Polymerase可以得到更高的扩增产量。有些Taq DNA Polymerase不能扩增的片段，Taq Plus DNA Polymerase可以正常扩增。PCR产物的3’端带A，可克隆至T载体。产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。


产品组分：
10×Taq Plus Buffer (with 15 mM MgCl2)：5×1mL
25 mM MgCl2：1 mL
dNTP Mix (10 mM each)：200 μl
Taq Plus DNA Polymerase (5 U/μl)：50 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
核酸外切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg λ-Hind III在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测：50 μl体系中，加入2 U本酶，以ddH2O为模板，扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl PCR体系中加入1.25 U本酶，以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin gene。30个循环后将1/10PCR产物进行1 %琼脂糖凝胶电泳，EB染色，可见有单一的1 kb条带。


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名称：2%明胶溶液(PCR级)
货号：BTN70905
规格：1.5mL
大量实验显示一定比例的明胶能够促进PCR反应。本产品为2%的明胶溶液，按1/5到1/20(具体取决于PCR反应体系)的比例加入到PCR反应体系中，可以提高PCR的效率。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
货号：BTN100814
规格：5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物，可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：全血Taq DNA聚合酶
货号：WE0127
规格：2500U
  本品是通过缺失Taq DNA Polymerase N端一段氨基酸和突变改造得到的DNA聚合酶。通过改造后使本产品能够全血中存在的抑制剂产生耐受作用，能够直接扩增人和小鼠全血样品中的DNA而无需事先对基因组进行提取和纯化。PCR产物3’端为A，可直接用于T/A克隆。

产品组成：

组份	2500U
BloodTaq DNA Polymerase，5 U/μl	5×100μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5×1.8ml

注意： BloodTaq PCR Buffer含有30 mM MgCl2

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；
5、室温存放一周，无明显活性改变。

使用方法：
1、使用前请将BloodTaq DNA Polymerase反复颠倒至完全混匀。
2、将PCR薄壁管置于冰上，加入除全血外的以下试剂。

试剂	50μl反应体系	终浓度
BloodTaq DNA Polymerase	1μl
BloodTaq PCR Buffer, 10×	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer(10μM)	2μl	0.4μM
Reverse Primer(10μM)	2μl	0.4μM
全血	≤10%
RNase-Free water	xμl
Total	50μl

注意：
a.加入全血前反复上下吸打完全混匀各种试剂、
b.DNA模板：可以使用肝素钠、Na-EDTA、K-EDTA或柠檬酸钠处理全血。通常建议全血含量为5-10%。不推荐使用高浓度血液。对于高GC含量的模板，加入10%DMSO。
c.引物：寡核苷酸引物长度通常含20-30个核苷酸，并且zuì好GC含量在40-60%并均匀分布于引物中。在常规的PCR反应中，引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。

3、zuì后将全血加入管底。
4、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	95℃	30 s	35-40 个循环
退火	50-68℃	30 s
延伸	72℃	250-500 bp/min
终延伸	72℃	10 min

注意：
a.PCR仪于94-95℃预热，将样品放置于PCR仪上开始循环。
b.BloodTaq提高了冷敏感性，具备了一些热启动特性。通常可以通过在冰上配制反应成分、zuì后加入聚合酶以及将热循环仪预热至变性温度(95℃)后立即进行反应来避免非特异性产物的产生。
c.变性温度与时间：在PCR循环前为了充分裂解血液细胞和释放/变性DNA，要求初始变性为95℃ 5分钟。
d.退火温度与时间:退火时间通常为30秒-1分钟。退火温度可以低于理论退火温度(Tm)5℃开始，通过梯度PCR进行优化。
e.延伸时间：延伸反应通常在72℃下进行。一般每250-500 bp延伸时间为1分钟。推荐72℃ 10分钟进行zuì终延伸。
f.通常35-40个循环可以达到zuì优扩增。

5、结果检测：反应结束后取5μl反应产物并加上电泳缓冲液一起电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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货号	名称	规格
BTN90302	25mM氯化镁溶液(PCR级MgCl2溶液)	5mL
BTN91107	SP6体外转录试剂盒	50次
WE0134	SuperSYBR Mixture(低含量ROX校正染料)	1ml|5ml
WE0150	一步法逆转录实时荧光定量PCR试剂盒(高含量ROX校正染料)	100次
ALH253	长片段Taq PCR MasterMix	0.5ml|5ml
ALH262	链cDNA合成试剂盒	20μl×50次

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