WH0080 2×PCR预混反应液

北京百奥莱博供应的2×PCR预混反应液用于科研目的，2×PCR预混反应液是我司众多优质核酸扩增(PCR)之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括2×PCR预混反应液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×PCR预混反应液
英文名称：2×PCR Reagent
产品货号：WH0080
产品规格：1ml（含染料)

本制品是一种扩增灵敏性与兼容性很强、于DNA提取扩增套装试剂盒的PCR试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行特异扩增，该试剂包含Taq Plus DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂及稳定剂。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的筛选。

本制品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量2×PCR Reagent溶液，加入快速DNA提取扩增套装所提取的模板和相应引物，并加入去离子水补足体积，使2×PCR Reagent溶液的浓度为1×即可进行反应。产品为加染料（为蓝色)产品，PCR反应完成后，产物可直接电泳。

适用范围：
·基因检测：－扩增灵敏性与兼容性、于快速DNA提取扩增套装试剂盒的PCR试剂，特别适合大规模基因检测、转基因检测、病原微生物或病毒检测应用或研究。
·保真度较高的DNA扩增和一些有特殊结构的复杂模板如GC含量高（>60%），有二级结构等的扩增：DNA片段的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定等。PCR产物如需克隆，纯化后可直接进行T/A载体克隆，如需提高克隆效率，建议加A后再进行T/A载体克隆。

产品组成：

组分	规格
2×PCR Reagent	1ml
ddH2O	1ml

2×PCR Reagent：
0.1U Taq Plus Polymerase/μl；500μM dNTP each；20mM Tris-HCl （pH8.3)；100 mM KCl；3 mM MgCl2；其它稳定剂和增强剂

储存条件：-20℃可长期保存，多次冻融不会影响活性。如需经常使用，可存放于4℃

质量控制：
经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温（15-25℃)存放一周，无明显活性改变。

使用举例：
注意：以下举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况，设定zuì佳反应条件。

1..用2×PCR Reagent产品，以人基因组DNA为模板（快速DNA提取扩增套装提取模板)，扩增1 kb的片段，反应体系为20μl（如反应体系不同，可按此比例增加或减少用量）。

加入物	加入量
Template	1～2μg
Primer 1（10 μM)	1μl
Primer 2（10 μM)	1μl
2×PCR Reagent	10μl
ddH2O	补至20μl

2．PCR反应循环的设置：
  
3．结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。

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名称：DNA Shuffling试剂盒
货号：BTN131178
规格：10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组，它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术，它以一个或多个基因为起始材料，通过先随机断裂成小片段，再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物)，zuì后再进行常规PCR(外加引物)等处理，zuì后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下：


产品特点：
1.即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化，1-2天即可完成，节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

试剂盒组成：

成分	规格
PCR Mix 3.0，2×	1.5mL
DNase I溶液(1U/μL)	10μl
溶液A，10×	60μl
溶液B，10×	60μl
超纯水	1mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，保存期限一年。

使用方法：
1.待突变基因片段的制备：待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb，同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段，则彼此的比例为1:1)，并且必须通过胶回收的方法回收，以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。zuì后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴，同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制，方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中，按顺序加入下列成分：

成分	用量
待突变基因片段(第1步制备)	2μg
溶液A	5μl
溶液B	5μL
DNase I工作液(第2步制备)	2μL
超纯水	36μL

4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟，然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳，用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意：一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围，zuì好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA，否则UV使DNA发生的交联将大降低后续扩增效果。
6.分光光度法测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行轮无引物PCR：

过程	温度	时间
PCR前变性	94℃	150s
PCR反应(40循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	10s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

9.取5-10μl进行电泳检测，然后进行PCR回收，得到轮PCR产物。
10.将回收的轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。

成分	用量
回收的轮PCR产物	1μL
PCR Mix 3.0，2×	50μL
自备DNA Shuffling引物	各1μM
超纯水	加水到100μL

11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。

过程	温度	时间
活化	94℃	150s
PCR反应(25次循环)	94℃	30s
	47.5℃	45s
	72℃	60s，每次循环后增加5s
PCR后延伸	72℃	10min

12.电泳检测，回收预期大小的PCR产物，用于后续的构建克隆文库实验(略)。

疑难解答：
Q：易错PCR和DNA Shuffling有何区别？
A：前者引入的是点突变，后者引入的是重组突变。示意图如下：


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