SV1386 T4 RNA 连接酶 2（dsR

T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）的品牌是百奥莱博，是优质的工具酶产品，本制品用于科研目的，我公司的T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 RNA 连接酶 2（dsRNA 连接酶）
产品货号：SV1386
产品规格：750U|150U

特性:
连接粘性末端接头
连接双链 RNA 中切刻的zuì佳用酶
可用于 DNA/RNA 杂交链中，RNA 3´ 羟基与 DNA 5´ 磷酸基的连接
概述:
T4 RNA 连接酶 2，也被称为 T4 Rnl2（gp24.1），同时具有 RNA 链分子间和分子内连接活性。与 T4 RNA 连接酶 1（M0204）不同的是，T4 RNA 连接酶 2 对双链 RNA 切刻的连接活性要明显高于对单链 RNA 的末端连接。该酶连接时需要相邻的 3´ 羟基与 5´ 磷酸基。同时该酶也可用于连接双链结构中 RNA 3´ 羟基和 DNA 5´ 磷酸基的切刻。
来源:
纯化自携带 T4 RNA 连接酶 2 基因的重组 E. coli 菌株。
反应条件:
1X T4 RNA 连接酶 2 反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃)，2mM MgCl2，1 mM DTT，400 μM ATP]，37℃ 温育。
质保声明:
无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
单位定义:
1 单位指 20 μl 反应体系中，37℃ 条件下，30 分钟完全连接 0.4 μg 的 23-mer 和 17-mer RNA 等摩尔混合物所需的酶量。单位活性检测的检测条件详请联系我们咨询。
浓度:
10,000 units/ml。

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货号	名称	规格
SV0158	BsaHI限制性内切酶	10KU|2KU
SV0294	CviAII限制性内切酶	1KU|200U
SV0360	EcoRV-HF限制性内切酶	20KU|20KU|4KU|4KU|2KU
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SV0381	FspI限制性内切酶	2500U|500U|250U
SV0505	MspJI限制性内切酶	1KU|200U
SV0645	SacI限制性内切酶	10KU|10KU|2KU|1KU

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名称：Klenow片段(无外切酶活性)
货号：YT510
规格：100U
本酶是没有外切酶活性的Klenow片段，是大肠杆菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)缺失了外切酶活性的突变体。Klenow Fragment，Exo-保留了DNA聚合酶I的5"→3"聚合酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5"→3"和3"→5"外切酶活性。

特点：由于Klenow Fragment，Exo-没有外切酶活性，其在末端补平时经常会在3"末端额外加上1个或多个核苷酸，因此不能用于产生平末端而用于后续的连接。
用途：5"突出末端的标记；随机引物法进行DNA标记；Sanger双脱氧法进行DNA测序等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为突变的 polA 基因片段。
分子量：约68kDa(单体)。
活性定义：37℃30分钟内，催化10nmol脱氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl2，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[3H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
纯度：不含DNA内切酶，不含RNase。
酶储存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl2， 10mM DTT。
失活或抑制：75℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Klenow Fragment，Exo-失活。金属离子螯合剂，无机焦磷酸盐(PPi)，大剂量的无机磷酸盐(Pi)均对Klenow Fragment，Exo-有抑制作用。
储存条件：-20℃。

使用说明：

1. 随机引物法进行DNA标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
DNA———————————————————————————————10µl(100ng)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————5µl
125µM random decamer or hexamer primer——————————————10µl
补充无核酸酶的去离子水——————————————————————至40μl
混匀后沸水浴孵育5-10分钟，立即置于冰浴冷却。进行后续步骤前离心沉淀液
3 dNTP Mixture (0.25mM each , without the labeled—————————4μl
[α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol (3000Ci/mmol)————————————1.85MBq (50μCi)
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————1µl (5U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 对于random decamer primer，37℃孵育5分钟；对于random hexamer primer，37℃孵育10分钟。
d. 加入4μl 0.25mM dNTP，混匀后37℃孵育5分钟。
e. 加入1μl 0.5M EDTA，pH8.0终止反应。
f. 取1μl上述液体用于检测标记的效率。
g. 用Sephadex G-50或Bio-Gel P-60或其它适当试剂盒纯化标记好的探针。

2. 双链DNA 5’突出(5’ overhang)末端的标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
Digested DNA ——————————————————————————10~15µl(0.1~4μg)
Reaction Buffer (10X)——————————————————————2µl
[α-32P]-dNTP, ~15-30 TBq/mmol(400-800Ci/mmol) —————————0.74 MBq(20μCi)
或 [α-32P]-dNTP, ~110 TBq/mmol(3000Ci/mmol)———————————2.96 MBq(80μCi)
3 dNTP Mixture (2.5mM each , without the labeled）————————2μl
Klenow Fragment，Exo-———————————————————————0.2μl (1U)
补充无核酸酶的去离子水———————————————————————至20µl
b. 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 30℃孵育15分钟。
d. 75℃孵育10分钟终止反应。

3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。

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