KFS250 活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试

北京百奥莱博供应的活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜)仅用于生物化学研究方面，我公司专注于细胞凋亡与增殖产品的研发、生产和供应，为您提供的活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜)质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法.荧光显微镜)
英文名称：Normal/Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit
产品货号：KFS250
产品规格：50T|100T

细胞坏死和凋亡是两种截然不同的细胞学现象，二者发生的过程在形态学上有很大的区别。在细胞坏死时，细胞膜发生渗漏，细胞内容物包括细胞器以及染色质释放到胞外。而在细胞凋亡过程，起始阶段，染色质固缩、分离并沿核膜分布，细胞质亦发生固缩，但细胞膜依然完整未失去选择透性；在凋亡后期，核染色质断裂为大小不等的片断，与某些细胞器如线粒体一起聚集，为反折的细胞膜所包围，以后逐渐分离，形成凋亡小体。

本产品提供的染料可以分别对正常细胞、凋亡细胞和坏死细胞的细胞核进行染色。其染色原理为：DyeReagent 1 只进入活细胞，正常的细胞核及处于凋亡早期的细胞核呈现绿色；Dye Reagent 2 只能进入死细胞，将死细胞以及凋亡晚期的细胞核染成橙色。因此通过在荧光显微镜下观察细胞显色和形态的不同，可以同时将正常细胞、坏死细胞、凋亡早期细胞和凋亡晚期细胞区分开来。

注意事项
1. Dye Reagent 1、2 及Mixed Dyes Reagent 有毒，操作时请戴手套；
2. zuì好根据需要检测的实际样品数在使用前将两种染料混合，剩余混合染液注意避光保存留待下次使用；
3. 利用血球计数板进行该项操作时，不要用血计板配套的那种质地较硬的盖玻片，而用普通的盖玻片反而更利于结果的观察。

操作方法
1. 用适当的方法诱导细胞凋亡；
2. 用PBS 洗涤细胞二次，并配成浓度为5×105~6×106cells/ml 细胞悬液；
3. 将Dye Reagent 1 和Dye Reagent 2 等体积混合形成Mixed Dyes Reagent（见注意事项2）；
4. 吸取25μL 的细胞悬液同1μL 的Mixed Dyes Reagent 轻轻混匀；
5. 吸取上述10μL 的混合液置于一洁净的载玻片，并用盖玻片盖上细胞（见注意事项3）；
6. 荧光显微镜510nm 激发波长观察，分别对下列四类细胞进行计数，注意细胞总量须超过200 个。

储存：2-8℃，避光，有效期12个月。

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名称：XTT细胞增殖与细胞毒性检测试剂盒
货号：BTN140635
规格：500次
XTT能被活细胞里的线粒体脱氢酶降解而产生橙黄色水溶性的甲臜，通过测定甲臜的光谱吸收，进而可以测定细胞的增殖情况。XTT与MTT同属四唑氮衍生物，它们检测细胞活性的反应原理相似，原理图如下：


产品特点：
1．盒灵敏度，可检测低细胞密度样品，检测结果的重复性优于MTT。
2．操作简便、快捷。可直接加入到检测平板。在96-孔板中检测时，无需洗涤或收获细胞，免去溶解步骤。
3．无放射性。不需要配制液闪混合物，也不需要处理废弃物。
4．与MTT相比，使用更安全。不需要使用挥发性的有机溶剂来溶解甲基产物。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	5ml
溶液B	50ml
说明书	1份

储存条件：低温运输、-20℃保存(但溶液B也可以常温运输和保存)，有效期一年。

使用方法：
下面操作是检测细胞毒性的试验，其他应用跟此类似或更简单(如生长曲线试验)，操作步骤可以以此为基础稍作修改即可，故不再赘述。

㈠、接种细胞
1．按常规胰酶消化法消化汇合的单层细胞，收集到含血清的培养基中。
2．200g离心5分钟收集细胞沉淀。
3．用培养基重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬浮液并计数。
4．将细胞稀释到2.5×103个/mL～5×10个/mL之间(需要根据细胞的生长速度决定)，如果不知道生长数度，一般可以稀释到1×10个/mL。
5．将足够量的细胞悬液转移到培养皿中(便于用排枪取样)。一个96孔板的MTT检测需要约20mL的细胞悬液。
6．用排枪在96孔板除的第2-11列各孔正中央加入200μL细胞悬液(对正常细胞)。如果是肿瘤细胞，则加入100μL肿瘤细胞悬液和100μL培养基(总体积为200μL)。
 注意：一定要把细胞加在孔的正中，否则细胞会聚集在孔的角落处，影响试验。
7．用排枪在96孔板除的第1和第12各孔中加入跟细胞悬液等体积的培养基。第1 列各孔将作为+培养基-细胞+MTT对照(用于测OD时调零)，第12列加培养基的作用是减少边缘效应对第11列反应的影响。
8．按常规细胞培养方法在37℃和5% CO2条件下孵育1-3天，使细胞进入指数生长期。

㈡、药物处理
9．用培养基将药物稀释到8个待测浓度(如果不知道待测浓度，则需要预试验确定)，一般一种药物需要做3块平行板。
10．去除第2到第11列(共10列)各孔中的培养基(不要触动细胞)，保留第1 列和第12列各孔中的培养基。
11．在第2和第11列(共2列)的各孔中加入200μL新鲜培养基，这些孔将作为+培养基+细胞-药物的对照。
12．在第3到第10列(共8列)各孔中加入8个浓度梯度的待测药物，每列加入一个浓度的药物。
13．按常规方法把96孔板继续放在37℃和5% CO2条件下孵育一定的时间，此段时间即为药物处理细胞的时间，由用户自己决定。
14．处理结束后去除第2到第11列(共10列，均含细胞)所有孔中的培养基，并再加入100μL新鲜培养基。
15．每天换培养使细胞数量扩增2-3倍(所需时间随细胞不同而不同)。

㈢、存活细胞计数
16．在生长末期，去除第1到第11列各孔中的培养基后，再加入100μL新鲜培养基和10μL溶液A(含MTT成分)，用锡箔包裹住96孔板后放在37℃和5% CO2条件下继续培养4-8小时。
 注意：溶液A在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴至全部溶解，摇匀后使用。MTT有致癌性，一定要带手套操作。
17．小心吸弃孔内培养基(含溶液A)。由于培养基可能会影响光吸收，zuì好尽可能去除。
18．每孔加入100μL溶液B，置摇床上低速振荡10分钟，使MTT形成的formazan结晶物充分溶解。
19．由于产物不稳定，故需要立即在酶联免疫检测仪上选择490nm测定吸光度。
 注意：用第1 列各孔(+培养基-细胞+MTT对照)调零。
20．计数同样处理的各次重复的平均值。
21．以药物浓度为横轴，以吸光度为纵轴绘制曲线。由于各处理吸光度值差别很大，一般需将其转化成生长抑制率(以不加药物的第2和第11列各孔数据的平均数作为)，这样便于计算出IC50，用于各种药物处理效果的比较。
 注意：如果测生长曲线，则以时间为横轴。正常生长曲线一般呈现S型，具有促进作用的则斜率加大。

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